淺談A/B 級潔凈區(qū)的動態(tài)監(jiān)測

淺談A/B 級潔凈區(qū)的動態(tài)監(jiān)測

1 概述

    無菌藥品是指法定藥品標(biāo)準(zhǔn)中列有無菌檢查項目的制劑和原料藥，包括注射劑、眼用制劑、無菌軟膏劑和無菌混懸劑等。在藥品生產(chǎn)過程中，環(huán)境是影響藥品質(zhì)量的重要因素，生產(chǎn)環(huán)境和人員行為直接決定了藥品的質(zhì)量，尤其是無菌藥品生產(chǎn)過程。

2 實施動態(tài)監(jiān)測的意義和作用

    在A/B 級潔凈區(qū)中，實施動態(tài)監(jiān)測是為人員行為評價、終產(chǎn)品放行提供必要的依據(jù)，以便及時發(fā)現(xiàn)其中存在的問題，并及時采取有效的措施解決問題，以防不良影響進(jìn)一步擴大，

同時，也為空氣平衡、人員行為和房間消毒方法的進(jìn)一步改進(jìn)提供了依據(jù)。另外，以此來判定潔凈室是否達(dá)到了規(guī)定的潔凈度，持續(xù)、穩(wěn)定地為生產(chǎn)提供保障，是評估生產(chǎn)環(huán)境控制的有效工具，是無菌藥品放行的首要條件。

3 動態(tài)監(jiān)控項目和標(biāo)準(zhǔn)

3.1 監(jiān)測的項目

    在生產(chǎn)操作前，要檢查、控制好區(qū)域內(nèi)的溫度、濕度和壓差；在生產(chǎn)過程中，要監(jiān)測沉降菌、浮游菌、懸浮粒子和風(fēng)速等情況；在關(guān)鍵操作完成后，要監(jiān)測設(shè)施、設(shè)備的表面和人員衛(wèi)生狀況。同時，在生產(chǎn)開始前后，都要檢測隔離操作手套。

3.2 溫度、濕度監(jiān)測

     在2010 版GMP 中并無具體的要求，但是，筆者認(rèn)為，這不是相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)的降低，而是相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)的提高，需要每個企業(yè)從產(chǎn)品工藝、設(shè)備儀器、人員操作的舒適性、微生物生存環(huán)境等方面有效控制溫度和濕度。例如，中溫型微生物在25～30 ℃生長適宜；濕生型微生物在濕度為70%～90%的環(huán)境下生長、繁殖比較旺盛，因此，一般需要避開此溫度、濕度范圍。同時，溫度、濕度過高或過低，對人體的舒適度、人員的工作情緒等都有很大的影響，進(jìn)而還會嚴(yán)重影響A/B 級區(qū)人員的操作行為，無法有效保證產(chǎn)品的安全性。一般情況下，無菌制劑生存環(huán)境的溫度應(yīng)控制在18～24 ℃、濕度應(yīng)控制在45%～65%.

3.3 相對壓差監(jiān)測

     2010 版GMP 規(guī)定，不同潔凈度等級的潔凈區(qū)之間和潔凈區(qū)與非潔凈區(qū)之間的空氣靜壓差應(yīng)大于10 Pa，應(yīng)裝有指示壓差的裝置；容易產(chǎn)生粉塵的生產(chǎn)區(qū)域應(yīng)與相鄰的室（區(qū)）保持相對負(fù)壓；相同潔凈度級別的不同功能區(qū)（操作間）之間，應(yīng)保持適當(dāng)?shù)膲翰钐荻?。目前，常用的壓差表量程?/span>0～60 Pa之間，負(fù)壓的壓差表量程一般選擇在－30～30 Pa 之間，所以，在日常生產(chǎn)過程中，應(yīng)對儀器、儀表本身的校驗或校正情況加強監(jiān)督和管理，因為壓差可以增加異常報警的情況。但是，為了避免正常操作（比如開門）造成的報警，可以適當(dāng)增加報警延時裝置，具體的延時時間可以根據(jù)不同人員的開門、進(jìn)入或物料轉(zhuǎn)運、關(guān)門所需時間驗證得出。

3.4 粒子和微生物監(jiān)測

     潔凈區(qū)的設(shè)計必須符合相應(yīng)的潔凈度要求，達(dá)到“靜態(tài)”和“動態(tài)”的標(biāo)準(zhǔn)，同時，該區(qū)還應(yīng)當(dāng)動態(tài)監(jiān)測微生物（浮游菌、沉降菌、表面微生物）的情況。微生物主要包括病毒、立克次體、細(xì)菌、菌類和原生蟲類等，但是，與潔凈室有關(guān)的主要是細(xì)菌和菌類。因為細(xì)菌不能單獨生存，所以，它一般都附著在塵粒上，因此，可以通過空調(diào)的初效、中效、（亞）過濾阻隔塵埃粒子，同時，也能完成對細(xì)菌的阻隔。對無菌區(qū)來說，微生物檢測更重要，但是，直接檢測的周期長，所以，可以用粒子水平來間接衡量其具體的情況。也就是說，這兩方面的檢測可以為無菌生產(chǎn)過程環(huán)境的破壞度和衛(wèi)生狀況作評估，為終產(chǎn)品的放行提供數(shù)據(jù)支持。

4 動態(tài)監(jiān)測的方法和注意點

4.1 懸浮粒子

    目前，懸浮粒子的測定方法主要有顯微鏡法和自動粒子計數(shù)法兩種，而用于潔凈區(qū)空氣懸浮粒子監(jiān)測的儀器多為光散射粒子計數(shù)器和激光粒子計數(shù)器。綜合實際情況，建議在A 級區(qū)內(nèi)采用連續(xù)監(jiān)測系統(tǒng)檢測空氣懸浮粒子。在線監(jiān)測系統(tǒng)可以實時反饋監(jiān)測信息，以便監(jiān)控人員及時提出解決其中存在問題的方法。比如，提醒操作人員減緩動作幅度，為環(huán)境清潔、消毒、停機等待等生產(chǎn)過程控制提供依據(jù)。與此同時，還要為空調(diào)過濾器的日常檢查、維護(hù)建立一套完善的操作、檢測、更換程序。只有這樣做，才能有效地控制其中存在的風(fēng)險。

4.2 浮游菌

    經(jīng)常使用撞擊法中的狹縫式采樣器監(jiān)測浮游菌采樣器，通過多孔蓋抽取空氣，而氣流中的微生物則撞擊附著在標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)皿中瓊脂培養(yǎng)基的表面。通常情況下，在測定浮游菌時，每個采樣點的取樣量不得少于1 m3，而在生產(chǎn)過程中，可以設(shè)定采樣器，利用采樣、等待、再采樣的間隙方式監(jiān)測生產(chǎn)全過程。另外，浮游菌采樣器還有篩孔撞擊式、表面真空取樣、離心式、過濾式和液體沖擊式等采樣方式。

4.3 沉降菌

    沉降菌是用暴露法收集降落在培養(yǎng)皿中的活生物性粒子，并將其培養(yǎng)、繁殖后加以計數(shù)所得。沉降菌測定的培養(yǎng)皿應(yīng)布置在有代表性的地方和氣流擾動小的地方。具體的采樣方法和培養(yǎng)方法是，將培養(yǎng)皿放置在接近于操作高度的位置后，打開外蓋并倒扣放置，使培養(yǎng)基表面暴露出來。在靜態(tài)監(jiān)測時，培養(yǎng)皿應(yīng)放置不少于30 min 后再將外蓋蓋上收集；在動態(tài)監(jiān)測時，暴露時間應(yīng)根據(jù)沉降碟本身和環(huán)境兩方面因素驗證所得，單個沉降碟的暴露時間可以少于4 h，但是，不得超過4 h。在同一位置，可以使用多個沉降碟連續(xù)監(jiān)測并累積計數(shù)，然后收集，酵母菌和霉菌通常在20～25 ℃的條件下培養(yǎng)5～7 d后計數(shù)，而需氧菌通常在30～35 ℃的條件下培養(yǎng)48～72 h 后計數(shù)。

     沉降碟以其價廉、輕便、對空氣環(huán)境破壞較小等優(yōu)點被廣泛應(yīng)用于潔凈區(qū)環(huán)境檢測中。但是，在使用沉降碟時，應(yīng)先確認(rèn)沉降碟的暴露時間（記下平皿打開和結(jié)束的時間），以保證暴露后的培養(yǎng)基不會因失水等原因而影響微生物的正常生長。目前，好多廠家的培養(yǎng)皿是本廠自配的，密封性沒有購買的培養(yǎng)皿強，在生產(chǎn)過程中，轉(zhuǎn)運會對培養(yǎng)皿本身造成污染，使所得的結(jié)果出現(xiàn)假陽性。所以，建議在生產(chǎn)過程中，應(yīng)使用培養(yǎng)皿本身的空白對照或購買密封性好的培養(yǎng)皿，以提高檢測結(jié)果的可信度。

4.4 物體表面微生物測試

    物體表面微生物測試可以確定物體（包括工作服）表面微生物的污染程度。一般情況下，可以使用棉簽間接取樣后培養(yǎng)、直接接觸法取樣和表面沖洗法3 種方法，而利用直接接觸法時，所用的接觸碟要放置至室溫后使用。

4.4.1 棉簽擦拭表面取樣方法

     棉簽擦拭表面取樣方法的取樣面積一般為25 cm2，人體表面擦拭至少應(yīng)包括雙手手指印、頭、口罩、肩部、前臂、手腕和腿等。棉簽間接取樣適用于不規(guī)則表面，取樣時，手握住拭子柄，以30°角與取樣表面接觸，采用S 型或Z 型緩慢并旋轉(zhuǎn)棉簽充分擦拭。如果拭子頭為藻酸鈣材料，則要用稀鹽酸溶液作為稀釋劑（比如質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的檸檬酸鈉溶液），這樣才能讓拭子頭*溶解。

4.4.2 直接接觸法

     直接接觸法是將接觸碟直接接觸需采樣的物體表面，接觸時間一般在10 s 左右，培養(yǎng)后便會長出菌落。因為該方法容易操作而且可以定量，所以，被廣泛使用。但是，這個測試只適用于平整光滑的表面，通常在灌封或灌裝后清場前取樣。取樣后，需用蘸有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為75%的乙醇的紗布擦拭被取樣表面，以除去殘留。將取樣后并做好標(biāo)記的接觸碟置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)箱的參數(shù)一般設(shè)定在30～35 ℃，培養(yǎng)72 h 后計數(shù)。

4.4.3 表面沖洗法

    表面沖洗法適用于監(jiān)測大面積區(qū)域內(nèi)表面的微生物含菌量，包括設(shè)備軌道、儲水罐等。用定量的無菌水沖洗表面，收集淋洗水，用膜過濾法計算微生物的數(shù)量。

4.5 風(fēng)速測試

    檢測生產(chǎn)過程中A 級區(qū)的風(fēng)速，使生產(chǎn)環(huán)境的風(fēng)速符合指導(dǎo)值（0.36～0.54 m/s），同時，還可以判斷層流是否開啟、是否正常運行、是否被堵或泄漏，使生產(chǎn)環(huán)境達(dá)到要求。目前，由于安裝的隔離器密閉性良好，所以，經(jīng)過相應(yīng)的驗證，也可以適當(dāng)?shù)亟档蛯恿黠L(fēng)速。部分文獻(xiàn)指出，A 級區(qū)可以選擇正壓無菌紊流的流型，不一定都要選擇層流流型。

4.6 隔離操作器手套的檢測

    目前，檢測手套時一般采用完整性檢測，對其內(nèi)部施加一定的壓力，在規(guī)定時間內(nèi)，壓力降低值在可接受范圍內(nèi)即視為合格。另外，還可以在每個班次生產(chǎn)前后，增加手套目檢程序等。檢測周期要根據(jù)產(chǎn)品的特點、設(shè)備和班次安排等因素驗證得出。

5 日常監(jiān)控取樣點和取樣頻次

     關(guān)鍵點的位置作為取樣點并不一定適用，所以，必須考慮環(huán)境監(jiān)測會不會加大產(chǎn)品污染風(fēng)險的概率。比如懸浮粒子的取樣點，一般布置在距離地面0.8～1.5 m 的位置，盡量避免在回風(fēng)口附近取樣，而且測試人員應(yīng)站在取樣口的下風(fēng)側(cè)等。潔凈區(qū)監(jiān)測中的取樣點和取樣量可以比潔凈區(qū)級別確認(rèn)時的取樣點和取樣量少，通過驗證確定取樣點，且其要通過風(fēng)險分析研究和監(jiān)測結(jié)果分析（至少要有6 個月以上的運行數(shù)據(jù)作為分析的基礎(chǔ)）。監(jiān)測頻次問題也是一個值得深思的課題，監(jiān)測頻次不夠，就不能很好地反映其中存在的問題——監(jiān)測頻次過多，不利于資源優(yōu)化。因此，監(jiān)測頻次的確定一般使用風(fēng)險數(shù)值分布（RNR），即風(fēng)險發(fā)生的嚴(yán)重性（SEV）與風(fēng)險發(fā)生的可能性（OCC）的乘積。根據(jù)風(fēng)險數(shù)值的大小確定不同的監(jiān)測頻率，同時，也要建立切實可行的措施降低其中的風(fēng)險。

6 日常視頻監(jiān)控

潔凈區(qū)作為制藥企業(yè)的生產(chǎn)場所，對環(huán)境、人員都有嚴(yán)格的規(guī)定和要求，潔凈廠房的監(jiān)測顯得尤為重要?，F(xiàn)主要通過環(huán)境在線監(jiān)測系統(tǒng)(EMS)對潔凈區(qū)環(huán)境進(jìn)行嚴(yán)格的管理和控制。實現(xiàn)潔凈區(qū)遠(yuǎn)程非現(xiàn)場監(jiān)管的管理模式成為了必然選擇，選擇潔凈區(qū)嵌入式攝像頭對潔凈區(qū)實現(xiàn)遠(yuǎn)程非現(xiàn)場監(jiān)管。潔凈區(qū)嵌入式攝像頭是一款針對潔凈區(qū)、無塵室重要設(shè)備/關(guān)鍵崗位定點實時監(jiān)控的攝像頭，純平面板設(shè)計風(fēng)格，采用嵌入彩鋼板的安裝方式，安裝完成后攝像頭面板與彩鋼板墻面平齊，實現(xiàn)了潔凈區(qū)攝像頭的零衛(wèi)生死角，清潔方便，在清潔墻面的同時實現(xiàn)攝像頭的清潔。采用標(biāo)準(zhǔn)POE供電方式，能夠快速多點布控，兼容主流視頻系統(tǒng)。

7 一般超標(biāo)處理方法和報告打印

     在日常監(jiān)測過程中，如果監(jiān)測數(shù)據(jù)出現(xiàn)偏差時，其數(shù)據(jù)就會高于設(shè)定的限度，所以，必須通過CAPA（預(yù)防和糾正措施）調(diào)查發(fā)生了什么，如何防止該問題再次發(fā)生，而偏差及其后續(xù)措施都必須有相應(yīng)的記錄。所以，要從人、機、料、法、環(huán)、測六個方面分析問題，運用風(fēng)險評估工具排查風(fēng)險點，找出要因，制訂切實可行的措施來解決問題，同時，還可以做必要的培訓(xùn)、考核和評估工作，以便從根本上解決問題。在日常監(jiān)測過程中，每一批報告都要打印出，并附入相應(yīng)批的生產(chǎn)記錄中。生產(chǎn)時間一般可以分為準(zhǔn)備、自凈、生產(chǎn)和清場4個階段，但是，筆者認(rèn)為，報告打印的時間要包括環(huán)境的自凈時間和生產(chǎn)時間，并要備注解釋監(jiān)測超常和超標(biāo)結(jié)果，從而保證產(chǎn)品生產(chǎn)情況的可追溯性。

8 結(jié)論

     隨著藥品監(jiān)管力度的加大，市場要求的增強，藥品生產(chǎn)企業(yè)必需嚴(yán)控生產(chǎn)全過程，尤其是無菌藥品的生產(chǎn)全過程。自動化技術(shù)的應(yīng)用，使藥品生產(chǎn)線無人化操作逐步成為可能；無菌隔離器的使用，讓關(guān)鍵工序無人操作成為了可能。但目前，國內(nèi)隔離操作器的使用還存在一些缺陷，比如，在線監(jiān)測培養(yǎng)皿放入和取出的過程，手套在線更換執(zhí)行困難，系統(tǒng)存在泄漏時，應(yīng)急處理措施缺失等。針對這些問題，需要進(jìn)行更為系統(tǒng)的研究。同時，應(yīng)用動態(tài)監(jiān)測系統(tǒng)可以實時提供數(shù)據(jù)、報警信息，方便及時控制生產(chǎn)過程，采取有效的手段解決生產(chǎn)過程中存在的問題。另外，應(yīng)用在線監(jiān)測系統(tǒng)，可以減少工作人員的外來干預(yù)，減少對生產(chǎn)環(huán)境造成的污染，保證產(chǎn)品的質(zhì)量，維護(hù)患者的生命安全。